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La PCR digitale en gouttelettes (Droplet Digital PCR, ddPCR) est une technique de biologie moléculaire permettant la quantification absolue et précise d’ADN ou d’ARN
Grâce à sa sensibilité, cette technologie est particulièrement adaptée à la détection de variants rares, à l’étude des variations du nombre de copies de gènes (CNV) et à l’analyse de l’expression génique.
Présentation de la technologie ddPCR
La ddPCR repose sur une technologie microfluidique permettant de partitionner chaque échantillon en environ 20 000 microgouttelettes, au sein d’une émulsion eau-huile.
Chaque gouttelette constitue une réaction PCR indépendante. Après amplification, les gouttelettes sont analysées individuellement afin d’identifier celles contenant la séquence cible.
Cette approche permet une quantification absolue du nombre de copies d’acides nucléiques, sans nécessiter de courbe d’étalonnage, contrairement à la PCR quantitative classique (qPCR).
La ddPCR offre une sensibilité et une précision particulièrement intéressantes pour certaines applications, notamment la détection de variants génétiques rares, l’analyse des variations du nombre de copies (CNV) et la quantification de l’expression génique, y compris à partir de cellules uniques (Single Cell).
La plateforme iGenSeq de l’Institut du Cerveau, à Paris, propose la réalisation des différentes étapes de ddPCR sur des échantillons d’ADN ou d’ARN, grâce à un système complet Bio-Rad.
Les équipements sont accessibles dans le cadre d’une mise à disposition après formation. Réservation sur IRIS : Réserver les équipements ddPCR.
Générateur automatique de gouttelettes AutoDG (Bio-Rad) |
Le générateur automatique AutoDG permet de partitionner les échantillons en milliers de gouttelettes, nécessaires à la réalisation des réactions de PCR digitale.
Cet équipement peut préparer jusqu’à 96 réactions en moins de 45 minutes, grâce à un processus automatisé ne nécessitant pas d’intervention pendant la génération des gouttelettes, une fois l’appareil chargé et le programme lancé.
Disponible pour les prestations ou en mise à disposition après formation.